在許多細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)、純化及蛋白-蛋白互作等免疫實(shí)驗(yàn)（如WB、IP、Co-IP、ChIP）中，細(xì)胞裂解是關(guān)鍵一步。
根據(jù)不同細(xì)胞類型、蛋白定位及下游應(yīng)用，需要不同的細(xì)胞裂解液進(jìn)行細(xì)胞裂解及蛋白提取（表1）。
- 表1 根據(jù)不同蛋白定位選擇裂解液
| 蛋白定位 |
裂解液 |
| 全細(xì)胞 |
NP-40、RIPA |
| 細(xì)胞質(zhì)（可溶性蛋白） |
Tris-HCl |
| 細(xì)胞質(zhì)（細(xì)胞骨架等不溶性蛋白） |
Tris-Triton |
| 細(xì)胞膜 |
NP-40、RIPA |
| 細(xì)胞核 |
RIPA |
| 線粒體 |
RIPA |
RIPA裂解液
RIPA裂解液是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液，獲得的蛋白樣品可用于常規(guī)WB、IP等實(shí)驗(yàn)。
組分：25 mM Tris-HCl, pH 7.6、150 mM NaCl、1% NP-40、1%去氧膽酸鈉、0.1%十二烷基硫酸鈉（SDS）。
IP裂解液
IP裂解液是一種改良后的RIPA裂解液，具中等強(qiáng)度效力，可高效溶解細(xì)胞蛋白，但不會(huì)像RIPA一樣釋放染色體組DNA或破壞蛋白復(fù)合物。適合下游免疫沉淀或親和吸附應(yīng)用。
組分：25 mM Tris-HCl, pH 7.4、150 mM NaCl、1% NP-40、1% mM EDTA、5% 甘油。
NP-40裂解液
NP-40裂解液是一種很溫和的非離子型去垢劑，與蛋白結(jié)合力強(qiáng)，尤其適用于膜蛋白非變性條件下的溶解。
組分：50mM Tris-HCl pH 8.0、150mM氯化鈉、1％NP-40；加蛋白酶抑制劑：抑肽酶、亮肽素、胃抑素，每種1μg / ml；使用前立即添加1mM PMSF。
Tris-Triton裂解液
Tris-Triton裂解液是非離子型表面活性劑，效力介于NP-40和SDS之間，下游應(yīng)用有WB、ELISA、IP。
組分：10mM 三羥甲基氨基甲烷(Tris)，pH值7.4、100mM NaCl、1mM EDTA、1mM EGTA、1% Triton X-100、10% 甘油、0.1% SDS、0.5% 去氧膽酸鈉。
- 相關(guān)產(chǎn)品
| 品名 |
CAS |
貨號(hào) |
Sodium chloride, 99.5%, reagent grade
氯化鈉，試劑級(jí) |
7647-14-5 |
105864 |
4-Nonylphenyl-polyethylene glycol (NP-40)
4-壬基苯基-聚乙二醇 |
9016-45-9 |
931454 |
Triton X-100, for bio
曲拉通 X-100，用于生化 |
9002-93-1 |
905959 |
Tris(hydroxymethyl)aminomethane hydrochloride (Tris HCl), 99%, for bio
三(羥甲基)氨基甲烷鹽酸鹽，用于生化 |
1185-53-1 |
165488 |
Sodium deoxycholate, 97%, for bio
去氧膽酸鈉，用于生化 |
302-95-4 |
927090 |
Sodium dodecyl sulfate (SDS), 99%, for biochemistry
十二烷基硫酸鈉，用于生物化學(xué) |
151-21-3 |
105893 |
Tris(hydroxymethyl)aminomethane (Tris), 99.5%, extra pure
三(羥甲基)氨基甲烷，特純 |
77-86-1 |
226162 |
Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), 99%, reagent grade
乙二胺四乙酸，試劑級(jí) |
60-00-4 |
932641 |
Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N',N'-tetraacetic acid (EGTA), 99%
乙二醇-雙(2-氨基乙基醚)-N,N,N’,N’-四乙酸 |
67-42-5 |
136111 |
Glycerol, 99%, for bio
甘油，用于生化 |
56-81-5 |
921371 |